就是按皱纹的程度不同分为从0至 4的几个等级

  花王(株)生物科学研究所象纤维芽细胞这样的非肌肉细胞的收缩力在细胞的形态、血管的形成、创伤治愈等等方面都担 任着非常重要的角色并起着非常重要的作用。一般认为,非肌肉细胞能够产生相当于平滑肌细胞(发 力作用肌肉细胞)1/10到1/100的力量。因此我们进而考虑真皮里的纤维芽细胞产生的收缩力,会以 某种形式对皮肤的形态或皮肤的弹性等带来影响。 我们将被称为真皮典型的纤维芽细胞采用包埋胶原蛋白胶层培育方法,搜寻了诱发细胞产生收 缩力的本原剂。结果发现,欧洲七叶树(Aeseulus hippocastanum)的提取物具有提高纤维芽细胞收 缩力的作用。该欧洲七叶树的提取物安全性很高、适于调配入化妆品中。(因此、我ff,又通过人体的 实验,对该提取物除去皱纹的有效性进行了探讨研究。’ 欧洲七叶树提取物欧洲七叶树(Aesculus hippocastanum)提取物是从Maruzen Pharma Co.,Ltd.(Hiroshima,Japan)处 购买的。蒸发后所剩固体约为1.0wt/vol%(剩下固体重量%)。 细胞培育 人体皮肤纤维芽细胞采用含有5%牛胎儿血清(FBS)的Dulbecco’s modified eagle’s medium(DMEM)进行了培育。本次研究使用了从继代数3到8的细胞。 纤维芽细胞包埋胶原蛋白胶层的制作 胶原蛋白溶液(Cell matrix Type I,Nitta Gelatin Inc,Tokyo)里包含浓缩培养基、HEPES-NaC03溶 液、FBS、精制水,并让纤维芽细胞的分散液在温度为4"C缓慢地使之混合,制成了含有3.0105cells/ ml的细胞和1.5mg/ml胶原蛋白的细胞分散胶原蛋白溶液。将细胞分散胶原蛋白溶液灌入硅橡胶制成 的模型(25mm 45mm、深5mm)里,并使其在37。C状态下凝胶化。24小时后加添无血清培养基并除去模型,使之浮游于无血清培养基中。 收缩力的测定 胶原蛋白胶层提取物里培育的纤维芽细胞的收缩力,是按照众所周知的文献记载的方法进行测 定的。也即是:接上测定纤维芽细胞包埋胶原蛋白胶层张力的传感器,使其在无血清培养基中保持 252. 37*(2,为保证安稳化使其驯化1小时。向无血清培养基里加添已溶解的各种植物提取物使其作用,用 BIOPAC system(BIOPACSystemsInc.,SantaBarbara,CA,USA)方法测定收缩力的变化并记录下来。 由Cytochalasin D进行阻碍 按上述方法使欧洲七叶树提取物产生作用、促进细胞收缩力之后,加添CytochalasinD(2 uM、 最终浓度1、观测了收缩力的变化。 应力纤维的萤光显微镜观察 将在胶原蛋白胶层细胞培养玻片上培养的纤维芽细胞、在无血清培养基里培育24小时。用欧洲 七叶树提取物(O.003剩余%)对细胞进行10分钟处理后、用福尔马林进行固定,使用Rhodamine phalloidin(Molecular Probes Inc.,Eugene,USA)进行染色后,利用萤光显微镜进行观察。 使用人体皮肤的试验方法 人体皮肤试验中选择的对象是40名健康的女性志愿参加者(35—45岁、平均38.4岁)。试验前, 向她们详细说明了试验的目的、方法并征得了她们的同意。试验部位为整个脸部,试验期间为9周、 以2重盲检(任意抽检)的方式进行。关于皱纹的改善效果,是根据照片比例尺寸、由参加试验的 专家们通过目视检测并给出分数的方式来进行评价的。简单说来,就是按皱纹的程度不同分为从0至 4的几个等级。即按:等级0=无皱纹、等级1=有极少皱纹、等级2=有少量皱纹、等级3=有皱纹、 等级4=有大量皱纹,进行了分类。本次评价还使用了4分后的中间等级(每个O.25)(总共17个等 级)。在进行分数评定之前,让自愿参加人员在控制为恒温度、高温度(室温25"C、湿度34-40%)的 室内进行至少15分钟的马Ill化。 涂抹方法TopicalApplication 制作含3%欧洲七叶树提取物的简单凝胶处方,连续9周、按每日至少2次涂抹眼眶周围。为便 于对照、也使用了不含有欧洲七叶树提取物的安慰剂凝胶。参加试验的人一次使用于涂抹的凝胶量 约为O.2ml。 统计分析Statistical Analysis 该次人体皮肤试验是按Mann.Whitney.U test方法进行统计的,其有意水准设定在P<0 05。 结果与考察 我们通过对多种植物提取物对收缩力的影响进行探讨研究、结果发现欧洲七叶树提取物O.001% (剩余量wt%)能大约诱发出10-20dynes的收缩力。生姜Ginger(Gingiberofficinale)、Baikal黄金花 Skullcup(Scutellariabaicalensis)、黄柏(黄檗)Amurcorktree(Phellodendronamuren)的提取物也能诱发 出收缩力。作为阳性控制而使用的Thrombin、LPA(1ysophosphatidieacid),分别诱导出了30dynes、10 dynes的收缩力。 再者、妨碍肌纤脘(actin)聚合的阻碍剂CytochalasinD,对欧洲七叶树提取物诱发收缩力产生 何种影响?我们也对此作了探讨研究。结果表明,由欧洲七叶树提取物诱发出的收缩力被Cytochalasin 253 D(2u M,最终浓度)消除了。另外在研究欧洲七叶提取物的作用对纤维芽细胞形成应力纤维的影 响时、通过rhodamine phalloidin染色观测、判明了确有显著的应力纤维的形成。基于如上事实,给了 我们如下启发:欧洲七叶树提取物促进肌纤脘聚合及随后应力纤维之形成,从而诱发出细胞的收缩 力。我们虽然没有对其它植物提取物的作用机制进行研究,但是可以推测、它们同样地能够起到这 种作用。 这些能够诱发纤维芽细胞的收缩力的植物提取物的invivo活性状况虽然还不甚明了。然而、纤 维芽细胞等非肌肉细胞的收缩力,在细胞的形成、血管形成、创伤治愈等方面,~一正如在 myofibroblasts方面被认可的一样,担任着非常重要的角色并起着非常重要的作用。因此,我们可以 认为同欧洲七叶树提取物诱发的纤维芽细胞的收缩力,在皮肤的形态或弹性的变化中担任着重要的 角色。所以,我们在志愿参加者们的协助下,通过试验,对这些提取物具有改善皱纹的效果作出了 评价。 在人体皮肤的试验时,采用了含有3%欧洲七叶树提取物的凝胶处方。试验对象为40名健康的 女性志愿参加者。按每日至少2次、连续9周、将凝胶涂抹于眼眶周围,所有40名参试者在试验过 程中,既无刺激感也未产生红斑,试验顺利结束。 通过对皱纹改善效果的观察分析,以眼梢处看来、9周后比0周时,明显看出安慰剂涂抹群的皱 纹分数有意增加(恶化)了;相反,涂抹欧洲七叶树提取物6周及9周后,与0周时相比,判明了眼 梢处的皱纹分数已有意降低。而且、将欧洲七叶树提取物涂抹在下眼睑、6周及9周后与0周时相比, 其涂抹群处的变化也出现了同样的结果。在试验期间中,还发现皮肤的弹性无论在安慰剂群还是在 样晶群涂抹群都出现了始料未及的变化。这种皮肤弹性变化的原因尚不明白,须要作更进一步的分 析研究。 众所周知欧洲七叶树提取物有抗肿胀活性的效用。我们在这里的研究更进一步显示出:该提取 物还具有改善皱纹的作用。我们认为,是纤维芽细胞产生的收缩力引起真皮组织紧缩、从而有效改 善皱纹。

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